革蘭氏染色是通過結(jié)晶紫初染、碘液媒染、乙醇脫色和沙黃復(fù)染四步反應(yīng),將細菌分為革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的鑒別技術(shù)。
革蘭氏染色原理基于細菌細胞壁結(jié)構(gòu)差異。革蘭氏陽性菌細胞壁含大量肽聚糖和磷壁酸,形成厚密網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),經(jīng)乙醇脫色時肽聚糖脫水收縮,結(jié)晶紫-碘復(fù)合物被保留而呈紫色。革蘭氏陰性菌細胞壁肽聚糖層薄且外包脂多糖外膜,乙醇溶解外膜脂質(zhì)并洗脫結(jié)晶紫-碘復(fù)合物,復(fù)染后呈現(xiàn)紅色。染色結(jié)果受菌齡、脫色時間等技術(shù)因素影響,需標(biāo)準(zhǔn)化操作。該技術(shù)對臨床抗生素選擇有指導(dǎo)價值,如青霉素對革蘭氏陽性菌更敏感。
進行革蘭氏染色時需使用新鮮培養(yǎng)菌落,涂片厚度均勻,嚴(yán)格控制脫色時間10-30秒。染色后需立即鏡檢避免褪色,觀察時注意區(qū)分真假革蘭氏可變性現(xiàn)象。實驗室應(yīng)定期用金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌作質(zhì)控菌株驗證染色試劑有效性。該技術(shù)作為微生物學(xué)基礎(chǔ)檢測手段,須結(jié)合菌落形態(tài)和生化試驗綜合判斷,不可單獨作為診斷依據(jù)。
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